評判Platinum色譜柱的好壞,使用前都要對其性能進(jìn)行考察,使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查。柱性能指標包括在一定實(shí)驗條件下下的柱壓、理論塔板數、對稱(chēng)因子、容量因子和選擇性因子的重復性,或分離度。一般說(shuō)來(lái)容量因子和選擇性因子的重復性在±5%或±10%以?xún)?。進(jìn)行柱效比較時(shí),還要注意柱外效應是否有變化。具體操作方法如下:
1.在進(jìn)行樣品檢測前,至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。流動(dòng)相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配制以保持新鮮避免細菌產(chǎn)生。
2.流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾,消除流動(dòng)相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱,以免柱性能損壞。
3.流動(dòng)相需脫氣后使用,可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時(shí)使用的流動(dòng)相與Platinum色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區別,應該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(cháng)的平衡時(shí)間。
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